PCR-MIX, PRONTA PARA O USO, MGCI2 [1,5MM], TAQ 0,5U, DNTPS [200UM]

DESCRIÇÃO: 
A PCR MIX LGC FOI OTIMIZADA PARA UTILIZAÇÃO EM ROTINAS DE LABORATÓRIO PARA AMPLIFICAÇÃO DE FRAGMENTOS DE DNA DE 0,2 A 2,0 KB POR PCR. É UMA SOLUÇÃO PRONTA PARA O USO QUE CONTÉM ENZIMA TAQ DNA POLIMERASE, DNTPS, MGCL₂ E TAMPÕES DE REAÇÃO EM CONCENTRAÇÕES IDEAIS PARA A AMPLIFICAÇÃO DE DNA E CDNA ATRAVÉS DA TÉCNICA DE PCR.
 
COMPONENTES:
CADA SISTEMA CONTÉM QUANTIDADE DE REAGENTES SUFICIENTE PARA REALIZAR 100 REAÇÕES DE AMPLIFICAÇÃO POR PCR EM VOLUME FINAL DE 50µL.
 
2 MICROTUBOS CONTENDO:

1.250 µL PCR MIX LGC, 2X

2 MICROTUBOS CONTENDO:

1.000 µL ÁGUA ULTRA-PURA DEPC TRATADA, LIVRE DE ENDONUCLEASES.

PCR MIX LGC, 2X:

·   TAQ DNA POLIMERASE (2,5 U REAÇÃO) EM CONCENTRAÇÃO E TAMPÃO DE REAÇÃO ADEQUADOS, (TRIS-HCL PH: 8,5, KCL),

·   200 MM CADA DNTP,

·   1,5 MM MGCL₂,

 
PROCENDÊNCIA DA ENZIMA:
A TAQ DNA POLIMERASE RECOMBINANTE É OBTIDA DA BACTÉRIA THERMUS AQUATICUS E EXPRESSA EM E. COLI.

CONTROLE DE QUALIDADE:

ENSAIOS FUNCIONAIS: A PCR MIX LGC É TESTADA QUANTO A SUA PERFORMANCE ATRAVÉS DA REAÇÃO DE AMPLIFICAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR), DO FRAGMENTO DE 452 PB CORRESPONDENTES AO GENE DA GLICERALDEÍDO 3-FOSFATO DESIDROGENASE HUMANO (GAP). O PRODUTO DE PCR É VISUALIZADO EM GÉIS DE AGAROSE 1,5% SOB LUZ ULTRAVIOLETA.

 
PROTOCOLO BÁSICO:
PARA CADA REAÇÃO NO VOLUME FINAL DE 50 µL, SEPARAR 25 µL DA PCR MIX LGC 2X E ADICIONAR O DNA MOLDE, OS PRIMERS E ÁGUA PURIFICADA EM VOLUME TOTAL DE 25 µL (OS VOLUMES PODEM SER AUMENTADOS PROPORCIONALMENTE A ESTE CALCULO BÁSICO).
 
ATIVIDADE ENZIMÁTICA ASSOCIADA:
A ENZIMA TAQ DNA POLIMERASE CONTIDA NA PCR MIX LGC 2X APRESENTA ATIVIDADE DE POLIMERIZAÇÃO 5? ? 3?, DEPENDENTE DA ATIVIDADE DE SUBSTITUIÇÃO DA EXONUCLEASE, PORÉM CARECE DE ATIVIDADE DE EXONUCLEASE 3?  -  5?.

OBS: ESTE PRODUTO É UTILIZADO ESTRITAMENTE EM PESQUISA CIENTÍFICA, NÃO RECOMENDADO PARA O USO EM DIAGNÓSTICO CLÍNICO OU TERAPÊUTICO