Product ID: 926
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TRIPSINA 0,25%, 10X - 100ML

TRIPSINA 0,25%, 10X - 100ML

Referência: BR30045-01


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ARMAZENAMENTO: -20ºC
 
CARCTERÍSTICAS: É UMA SOLUÇÃO BALANCEADA COM TRIPSINA DE ORIGEM SUÍNA ISENTA DOS ÍONS CÁLCIO E MAGNÉSIO. A CONCENTRAÇÃO DESTA SOLUÇÃO É 10X, NECESSITANDO SER DILUÍDA PARA CONCENTRAÇÃO 1X NO MOMENTO DO USO. EM SUA COMPOSIÇÃO O EDTA ATUA COMO AGENTE QUELANTE. PERMITE O "DESCOLAMENTO" DAS CÉLULAS DE FRASCOS DE CULTIVO E/OU DESAGREGANDO CÉLULAS ENTRE SI ATRAVÉS DE SUA PROPRIEDADE PROTEOLÍTICA SOBRE PROTEÍNAS INTERCELULARES, E AINDA ALTERANDO A ESTABILIDADE DAS MEMBRANAS AO QUELAR O ÍON CÁLCIO.

APLICAÇÃO: ESTE TAMPÃO É INDICADO NA SEPARAÇÃO DE CÉLULAS DE ÓRGÃOS E/OU TECIDOS, OU MESMO CULTIVADOS EM MONO-CAMADAS OU CAMADAS MÚLTIPLAS. COMO O PROCESSO DE DESCOLAMENTO E SEPARAÇÃO DE CÉLULAS É FEITO GERALMENTE AO MICROSCÓPIO, É POSSIVEL CONTROLÁ-LO, INTERROMPENDO A SUA AÇÃO, ATRAVÉS DA ADIÇÃO DE MEIO CONTENDO SORO ANIMAL OU HUMANO.

COMPONENTES E CARACTERÍSTICAS FÍSICOQUIMICAS:
· TRIPSINA, EDTA, HBSS MODIFICADO E BICARBONATO DE SÓDIO,
· ASPECTO: LÍMPIDO E TRANSPARENTE
· PH: 7,0 + 0,2

CONSERVAÇÃO: DESCONGELAR APENAS NO MOMENTO DE USO. POR SE TRATAR DE UMA ENZIMA PROTEOLÍTICA, ELA PODE SOFRER AUTO-DIGESTÃO COM DIMINUIÇÃO DE SUA ATIVIDADE. A ALTERAÇÃO PARA VALORES MAIS PRÓXIMOS DE 7,9 E SUA UTILIZAÇÃO À 37OC PROVOCAM UM AUMENTO DE ATIVIDADE, OCORRENDO O INVERSO COM DIMINUIÇÃO DO PH E DA TEMPERATURA.

PARA REMOVER CÉLULAS DE CULTURAS ADERIDAS AO FRASCO:
1. REMOVA POR INVERSÃO OU POR ASPIRAÇÃO TODO O MEIO DO FRASCO DE CULTIVO.
2. ADICIONE APROXIMADAMENTE 0,1 ML/CM2 DA SOLUÇÃO DE TRIPSINA/EDTA PARA LAVAR RAPIDAMENTE A SUPERFÍCIE DE CÉLULAS. ESSA MANOBRA É RÁPIDA E SERVE PARA REMOVER O SORO REMANESCENTE. PODE-SE UTILIZAR MEIO DE CULTURA OU SOLUÇÃO  BALANCEADA EM MAIOR QUANTIDADE, MAS SEM SORO, O QUE PERMITIRÁ MAIOR ECONOMIA DA SOLUÇÃO DE TRIPSINA.
 3. ADICIONAR APROXIMADAMENTE 0,05 ML/CM2 DA SOLUÇÃO DE TRIPSINA/EDTA SOB A SUPERFÍCIE CELULAR E OBSERVAR AO MICROSCÓPIO. QUANDO AS CÉLULAS
ADQUIRIREM UM ASPECTO REDONDO E INDIVIDUALIZADO, DESLOCANDO-SE DO TUBO, PODE-SE INTERROMPER O PROCESSO COM A ADIÇÃO DE 0,2 ML/CM2 DE MEIO COM SORO À 10%. COMO O SORO POSSUI ALFA 1-ANTITRIPSINA, ELE NEUTRALIZARÁ A AÇÃO DA TRIPSINA. QUANDO SE TRABALHA COM MONOCAMADAS CELULARES QUE OCUPAM TODO O FRASCO, O DESCOLAMENTO PODE SER OBSERVADO A OLHO NU E O MEIO SE APRESENTARÁ COMO SE TIVESSE UMA FINA AREIA. É IMPORTANTE QUE A NEUTRALIZAÇÃO COM SORO SE FAÇA LOGO APÓS O DESCOLAMENTO DA CAMADA CELULAR, UMA VEZ QUE A MEMBRANA, POR SER LIPO-PROTÉICA, SOFRE A AÇÃO PROTEOLÍTICA DA TRIPSINA.
4. A SEGUIR, AS CÉLULAS SÃO HOMOGENEIZADAS E CONTADAS PARA DILUIÇÃO, CONGELAMENTO, REPIQUES CELULARES, ETC.
PARA REMOVER CÉLULAS DE ÓRGÃOS OU TECIDOS:
1. LAVAR BEM O ÓRGÃO OU TECIDO EM MEIO SEM SORO.
2. COM O AUXÍLIO DE UMA TESOURA DE ÍRIS, PICOTAR O ÓRGÃO EM PEDAÇOS BEM PEQUENOS (+1MM).
3. ASPIRAR TODO O SOBRENADANETE (OS PEDAÇOS GERALMENTE NÃO FLUTUAM).
4. ADICIONAR TRIPSINA/EDTA EM VOLUME DE 3 A 10 VEZES O CORRESPONDENTE DO TECIDO PICOTADO.
5. AGITAR LENTAMENTE EM UM ERLENMAYER, COM O AUXÍLIO DE UM AGITADOR MAGNÉTICO COM IMÃ REVESTIDO DE PTFE E ESTÉRIL. O TEMPO DE COLETA DA TRIPSINA COM CÉLULAS PODE SER COM INTERVALOS DE 10, 20 OU 30 MINUTOS.
6. APÓS O TEMPO DE AÇÃO DA SOLUÇÃO DE TRIPSINA ASPIRAR O SOBRENADANTE E, VERTÊ-LOS PARA TUBOS CONTENDO MEIO COMPLETO COM SORO À 10%. A PROPORÇÃO SERÁ DE VOLUME A VOLUME, ISTO É, PARA CADA 10 ML DE SOBRENADANTE, MISTURAR OUTRO ML DE MEIO COMPLETO COM SORO. VEJA QUE A EXTRAÇÃO DE CÉLULAS DO ERLENMAYER PODERÁ CONTINUAR A SER FEITA, BASTANDO PARA ISSO ADICIONAR MAIS TRIPSINA/EDTA.
7. CENTRIFUGAR POR 10 MINUTOS À 1000 RPM OS TUBOS CONTENDO TRIPSINA COM MEIO COMPLETO, DESPREZAR O SOBRENADANTE E ADICIONAR NOVO MEIO COMPLETO.
8. HOMOGENEIZAR E DISTRIBUIR AS CÉLULAS EM FRASCOS DE CULTIVO DE ACORDO COM A VITALIDADE E DENSIDADE CELULAR DESEJADA.

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Características